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蚓激酶基因在大肠杆菌中的表达

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【作者】 姜琼易增兴陈武

【Author】 JIANG Qiong et al (Bioengineering Institute of Yichun College,Key Laboratory of Active Ingredients Research in Natural Medicines of Jiangxi Province,Yichun,Jiangxi 336000)

【机构】 宜春学院生物工程研究所,江西省天然药物活性成分研究重点实验室

【摘要】 [目的]实现蚓激酶基因在大肠杆菌中的高效表达。[方法]采用RT-PCR技术,以含蚓激酶基因的质粒pMD18-Tf3为模板进行RT-PCR扩增,克隆了蚓激酶基因Tfc,并进行测序,之后将蚓激酶基因Tfc克隆到大肠杆菌表达载体pBV220,转化大肠杆菌DH5α,用LB培养基于30℃培养24 h后,然后调温至42℃继续培养2 h诱导蚓激酶基因表达,收集菌体,进行SDS-PAGE电泳,利用纤维平板法检验蚓激酶的活性。[结果]测序发现该基因全长729 bp,共编码243个氨基酸,GenBank登录号为EU167735。SDS-PAGE电泳表明诱导表达后菌体总蛋白在28 kD处有一特异性条带,而含空质粒pBV220的大肠杆菌经诱导表达后无该条带,表达蛋白主要以包涵体形式存在,无纤维蛋白酶活性。[结论]该研究为创新蚓激酶的生产工艺提供了依据。

【关键词】 蚓激酶大肠杆菌表达
【基金】 江西省教育厅科技计划资助项目(2005-229)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2008年31期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.31.037
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】4
  • 【下载频次】177
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