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棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒HaSNPV orf101的原核表达及抗体制备

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【作者】 李志远邱小慧周玥钱丽莹徐旭士

【Author】 LI Zhi-yuan et al(College of Life Science,Nanjing Normal University,Nanjing,Jiangsu 210046)

【机构】 南京师范大学生命科学学院

【摘要】 [目的]摸索棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒(HaSNPV)orf101编码蛋白原核表达条件并制备其多克隆抗体。[方法]根据HaS-NPVorf101序列,设计引物,引入适当的酶切位点,利用PCR扩增出基因片段并将其克隆至pGEM-TEasy载体,然后亚克隆至原核表达载体pGEX-KG,检测在不同条件下融合蛋白的表达产量及其折叠性质。原核表达产物经SDS-PAGE分离纯化,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。[结果]在IPTG诱导的条件下,融合蛋白GST-HA101可在大肠杆菌BL21中以包涵体形式高效表达,表达产物的大小为55.8 kDa。制备的多克隆抗体经1∶8 000倍稀释后用于Western Blot分析,获得特异性显色信号。[结论]原核表达蛋白及其多克隆抗体的获得为深入研究Ha101的基因功能打下了基础。

【基金】 教育部基金项目(2006104SBJ0123)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2008年35期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.35.064
  • 【分类号】S476.1
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】55
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