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抗HepG2核糖体展示抗体库的构建

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【作者】 周雷毛伟平冯娟刘洪云魏传静李文秀周凤云

【Author】 ZHOU Lei et al(Institute of Biochemistry and Biological Preparations,College of Life Science,Nanjing Normal University,Nanjing,Jiangsu 210046)

【机构】 南京师范大学生命科学学院生化与生物制药研究所

【摘要】 [目的]构建鼠源抗HepG2核糖体展示抗体库。[方法]以培养的HepG2肝癌细胞4次免疫Balb/c小鼠,取脾脏分离总RNA,逆转录合成第一条链,PCR扩增重链可变区和轻链k,经linker DNA连接形成VH/k核糖体展示抗体库。将VH/k与pMD18-T载体的连接产物转化E.coli TG1,蓝白斑筛选,挑取白色菌落,提取质粒,PCR鉴定,并测序。[结果]VH和k链得到正确的扩增,长度分别为399和647bp,VH/k连接产物正确,连接产物长度为1 093 bp。[结论]所采用的引物及反应条件能够扩增出目的基因,成功构建了鼠源抗HepG2核糖体展示抗体库,为进行核糖体展示体外筛选抗HepG2特异性单链抗体奠定基础。

【关键词】 核糖体展示单链抗体肝癌抗体库
【基金】 江苏省教育厅自然科学基金(08KJD350002)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2009年13期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.13.034
  • 【分类号】Q78
  • 【下载频次】96
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