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人白细胞介素-12的纯化及鉴定

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【作者】 黄进罗果葛正龙

【Author】 HUANG Jin et al(Department of Bioengineering,Zunyi Medical College Zhuhai Campus,Zhuhai,Guangdong 519041)

【机构】 遵义医学院珠海校区生物工程系遵义医学院中心实验室遵义医学院生物化学教研室

【摘要】 [目的]利用人白细胞介素-12(human interleukin 12,hIL-12)转基因马铃薯,探讨hIL-12的纯化条件。[方法]提取转基因马铃薯中的总蛋白,hIL-12的分离纯化步骤包括超滤、MKF-AIW阴离子交换层析、MKF-CIC阳离子交换层析。在阴离子交换层析吸附过程中采用试管法选择最佳吸附pH值,选择洗脱过程最佳洗脱pH值;选择阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值;ELISA法测定各纯化阶段收集的上清液或洗脱峰中的hIL-12的含量;非还原SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度;Western Blot检测纯化的hIL-12。[结果]阴离子交换层析吸附过程最佳吸附pH值为7.5,洗脱过程最佳洗脱pH值为7,阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值为6.5。纯化的hIL-12经非还原SDS-PAGE分析蛋白纯度为91%。Western Blot分析结果表明,在40 kD处有特异的蛋白条带出现。[结论]hIL-12转基因马铃薯经总蛋白提取,超滤,阴离子交换层析,阳离子交换层析纯化,获得了高纯度的hIL-12。

【基金】 贵州省科委重大攻关项目(2004NGZ002);贵州省教育厅重点项目(2004118)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2009年14期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.14.147
  • 【分类号】R392
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】63
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