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广谱拮抗菌B96-Ⅱ启动子的克隆研究

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【作者】 郝变青马利平乔雄梧张丽珍

【Author】 HAO Bian-qing et al(Institute of Loess Plateau,Shanxi University,Taiyuan,Shanxi 030006)

【机构】 山西大学黄土高原研究所山西省农业科学院山西省农药重点实验室

【摘要】 [目的]构建拮抗菌B96-Ⅱ的启动子文库,为B96-Ⅱ的绿色荧光蛋白标记提供试验基础。[方法]提取拮抗菌B96-Ⅱ的基因组DNA,以绿色荧光蛋白基因(gfp)为报告基因,以启动子探针pNW33N-gfp为载体,通过鸟枪法在E.coliDH5α中构建B96-Ⅱ的启动子文库。[结果]通过筛选获得了21个阳性克隆,编号为P1~P21,这些阳性克隆在荧光显微镜下发出明亮的绿色荧光。研究表明,在热激时间为90 s、用4μl酶连产物原液进行转化时,所得转化子数量最多,平均每平皿可得到167个转化子。[结论]表达绿色荧光蛋白的B96-Ⅱ启动子文库的成功构建为拮抗菌B96-Ⅱ的绿色荧光蛋白标记和环境行为研究奠定了良好的基础。

【关键词】 拮抗菌绿色荧光蛋白启动子克隆
【基金】 山西省青年基金项目(2007021037);山西省自然科学基金项目(2006年重点实验室开放基金);山西省留学人员项目(2006年82号)
【所属期刊栏目】 农业基础科学与方法 (2009年16期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.16.051
  • 【分类号】S476
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】64
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