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瘤胃甲烷生成菌PCR反应条件的优化

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【作者】 淡瑞芳藏丽丽龙瑞军魏小红张海涛

【Author】 DAN Rui-fang et al(Jiangsu Vocational and Technical College of Animal Husbandry and Veterinary,Taizhou,Jiangsu 225300)

【机构】 江苏畜牧兽医职业技术学院甘肃农业大学生物技术工程学院兰州大学草地农业科技学院甘肃草原生态研究所兰州大学青藏高原生态系统管理国际中心

【摘要】 [目的]优化适合于瘤胃甲烷生成菌的PCR反应体系。[方法]以1.5周岁健康的藏系绵羯羊瘤胃内容物总DNA为模板,用特异性引物对甲烷生成菌16SrDNA保守序列进行PCR扩增,并通过改变PCR反应体系中的各参数,优化其PCR反应体系中的相关参数。[结果]PCR最优程序为:94℃预变性3 min;94℃变性45 s,51℃退火45 s,72℃延伸90 s,35个循环;72℃后延伸7 min。优化后的PCR反应体系为:5.00μl缓冲液,4.00μl d-NTP,2.00μl引物(前引物和后引物各1.00μl),4.00μl MgCl2,0.25μlTaqDNA聚合酶和1.00μl 1∶100倍稀释的DNA模板,然后加水补足25.00μl。[结论]该研究为瘤胃甲烷生成菌功能的研究奠定了基础。

【关键词】 甲烷生成菌16SrDNAPCR反应条件优化
【基金】 国家自然科学基金重点项目(30730069)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2009年19期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.19.117
  • 【分类号】S852.6
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】135
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