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青海云杉ISSR-PCR反应体系的建立与优化

王文峰李毅马彦军李栋栋

甘肃农业大学林学院

摘要:[目的]确定适应青海云杉ISSR-PCR反应的最佳反应体系。[方法]以青海云杉(Picea crassifoliakom.)为材料,对影响其ISSR-PCR扩增结果的各因素(Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、模板DNA、引物、退火温度)进行筛选和优化。[结果]青海云杉ISSR-PCR最佳反应体系为在20μl反应体系中包含1μl10×buffer,1.5 mmol/L的Mg2+,0.2 mmol/L的dNTPs,TaqDNA聚合酶1.0 U,模板DNA40 ng,引物0.6μmol/L。对青海云杉ISSR-PCR最佳反应体系的退火温度进行梯度试验发现,引物UBC818的最适退火温度为54.2℃,且最适退火温度因引物而异。[结论]该优化ISSR-PCR反应体系的建立,为今后利用ISSR技术进行青海云杉种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位奠定了技术基础。
  • DOI:

    10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.21.115

  • 专辑:

    农业

  • 专题:

    林业

  • 分类号:

    S791

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