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猪轮状病毒VP4蛋白基因在大肠杆菌中的表达

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【作者】 肖长峰刘成倩卢永红陈斌吴双林张天庆易建中

【Author】 XIAO Chang-feng et al (College of Fisheries and Life,Shanghai Ocean University,Shanghai 201306)

【机构】 上海海洋大学水产与生命学院内蒙古农业大学动物科学与医学学院上海市农业科学院畜牧兽医研究所

【摘要】 [目的]研究猪的轮状病毒VP4蛋白基因在BL21大肠杆菌中的表达。[方法]以猪肺脏组织中分离的总RNA为模板,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增VP4蛋白的部分基因,将PCR产物克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒PGEX-4T-1-VP4并对重组质粒进行酶切和测序鉴定。将重组载体PGEX-4T-1-VP4转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达和SDS-PAGE分析,并对重组大肠杆菌进行可溶性分析。[结果]对猪肺脏组织中分离的总RNA进行RT-PCR扩增,获得875 bp的VP4部分基因,重组质粒PGEX-4T-1-VP4经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切和测序鉴定后,插入的猪轮状病毒VP4的cDNA编码区序列与已公布的猪GenBank核酸序列比对结果为99.5%;将重组质粒pGEX-4T-1-VP4-转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约58 kDa融合蛋白带。[结论]该研究为进一步研究轮状病毒的疫苗研制奠定了基础。

【关键词】 轮状病毒VP4基因克隆原核表达
【基金】 上海市浦江人才计划(PJ[20])
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2009年22期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.22.139
  • 【分类号】S852.65
  • 【被引频次】10
  • 【下载频次】199
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