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猪TLR7基因胞外区部分片段的克隆、表达及其重组蛋白的纯化分析

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【作者】 和燕玲房永祥陈国华刘磊景志忠

【Author】 HE Yan-ling et al(Key Laboratory of Animal Parasitology of Gansu Province,Key Laboratory of Veterinary Public Health of Ministry of Agriculture,State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou,Gansu 730046)

【机构】 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃农业大学

【摘要】 [目的]获得高表达量的蛋白,为进一步研制单克隆抗体提供较好的免疫原,同时也可为TLR7胞外区该片断蛋白未知区域的结构和功能研究奠定基础。[方法]应用PCR技术从重组质粒pcDNA3.1/CT-GFP-pTLR7上扩增出编码猪TLR7基因胞外区N端第27~202位氨基酸序列,利用BamHⅠ和HindⅢ酶切位点将其插入到原核表达载体PET30a中,重组质粒转化BL21(DE3)后,在不同条件下诱导表达。[结果]经SDS-PAGE分析表明,重组菌表达出约26 kD的融合蛋白,并证实主要以包涵体形式表达,其最佳诱导表达条件是37℃、0.5 mmol/LIPTG诱导6 h,表达量可接近50%;纯化的重组蛋白免疫小鼠后,间接ELISA检测抗体效价,结果该蛋白免疫BALB/c小鼠效价达105。[结论]TLR7胞外区该片断重组蛋白具有很好的抗原性,可以作为单克隆抗体研制的免疫原。

【关键词】 猪TLR7胞外区片段重组蛋白抗原性
【基金】 国家自然科学基金项目(30871884);国家高新技术“863”项目(2006AA10A203)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2009年24期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.24.135
  • 【分类号】S828
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】133
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