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植物病毒表达载体pClYVV/CP/W的构建及GFP表达的研究

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【作者】 王振东王晓华孟鹏秦会权郑新伟刘芳普薛立江张敏

【Author】 WANG Zhen-dong et al(College of Bioscience and Technology,Shenyang Agricultural University,Shenyang,Liaoning 110161)

【机构】 沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁省沈阳市农业检测中心深圳市九升生物制品有限公司

【摘要】 [目的]研究植物病毒表达载体pC1YVV/CP/W的构建及用pC1YVV/CP/W表达绿色荧光蛋白(GFP),为植物反应器生产有用蛋白、开发有效的植物病毒载体提供参考。[方法]用三叶草黄脉病毒侵染性全长cDNA克隆pC1YVV基因组的Mb/CP基因之间的一段多克隆位点和两侧含有病毒蛋白酶NIa切割识别序列的多聚脱氧核糖核苷酸接头,构建pC1YVV/CP/W载体,并将绿色荧光蛋白基因插入pC1YVV/CP/W中构建pC1YVV/CP/W/GFP载体,用反转录PCR对重组病毒克隆转录情况进行检测,并用Western杂交对重组病毒克隆表达的目的基因产物进行测定。[结果]pC1YVV/CP/W/GFP接种的蚕豆幼苗表现出与野生型C1YVV相同的症状,发病率达100%,表明重组病毒克隆pClYVV/CP/W/GFP有侵染性,外源基因的插入没有破坏载体pClYVV/CP/W的开放阅读框;外源基因在F4子代病毒基因组中稳定存在;重组病毒克隆pC1YVV/CP/W/GFP至少到F4子代病毒能稳定表达GFP。[结论]该研究结果为用植物表达有用蛋白提供了有用的植物病毒载体。

【基金】 辽宁省自然基金资助项目(20072122);辽宁省教育厅资助项目(05L339)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2009年28期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.28.041
  • 【分类号】Q943.2
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】266
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