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双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)的真核表达、纯化及鉴定

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【作者】 关振宏李影张茂林段铭

【Author】 GUAN Zhen-hong et al(Key Laboratory of Zoonosis,Education Ministry,Institute of Zoonosis,Jilin University,Changchun,Jilin 130062)

【机构】 吉林大学人兽共患病教育部重点实验室人兽共患病研究所吉林农业大学动物科学技术学院

【摘要】 [目的]获得真核表达的Flag-PKR融合蛋白,以用于流感病毒相关的PKR信号通路调控机制研究。[方法]以RT-PCR方法扩增PKR目的基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0-Flag中。将所构建的重组质粒pcDNA3.0-Flag-PKR转染293T细胞,利用Flag抗体偶联的琼脂糖凝胶(anti-Flag M2-Agarose)纯化Flag-PKR融合蛋白,所得产物进行SDS-PAGE、Western blot及体外活性鉴定。[结果]重组质粒转染293T细胞,Western blot显示表达出的融合蛋白能够被抗Flag的抗体特异性识别,其相对分子量约为69 kDa,与Flag-PKR融合蛋白大小相符;体外磷酸化试验表明,Flag-PKR融合蛋白能够发生自动磷酸化。[结论]在293T细胞中表达、纯化了有活性的Flag-PKR融合蛋白,为PKR信号通路的研究奠定了基础。

【基金】 国家自然科学基金资助项目(30800824);吉林大学农学部引进人才启动基金项目(4305050102B9)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2009年28期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.28.043
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】4
  • 【下载频次】216
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