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正交优化多重PCR反应体系检测3种食源性致病菌的研究

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【作者】 郝玉芹孙皆宜李艾杨国兴张伟

【Author】 HAO Yu-qin et al(Basic Teaching Department,Tangshan College,Tangshan,Hebei 063000)

【机构】 唐山学院基础教学部唐山学院环境与化学工程系河北省邯郸市疾病预防控制中心河北农业大学食品科技学院

【摘要】 [目的]建立金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌的快速、敏感、特异的多重PCR检测方法。[方法]根据金黄色葡萄球菌的nuc基因、沙门氏菌的IpaB基因、志贺氏菌的ipaH基因,设计3对特异性引物进行多重PCR检测,利用正交设计对多重PCR反应体系的镁离子、Taq酶、dNTP、引物的浓度在4个水平上进行L16(44)优化试验,并确定该检测方法的特异性与灵敏度。[结果]3对引物能特异性扩增出210、280、393 bp的目的条带。利用FTA滤膜提取模板DNA,采用建立多重PCR同时对3种食源性致病菌进行检测具有较高的灵敏度,灵敏度金黄色葡萄球菌为3.5×102cfu/ml、沙门氏菌为2.2×102cfu/ml、志贺氏菌为1.0×102cfu/ml。[结论]该检测方法准确、快速、高效,为同时检测食品中多种致病菌奠定了基础。

【关键词】 多重PCR食源性致病菌检测FTA滤膜
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2010年02期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.02.009
  • 【分类号】TS207.4
  • 【被引频次】33
  • 【下载频次】310
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