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金堂黑山羊FSHR启动子克隆及转录活性分析

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【作者】 梁天宇李键曹冶

【Author】 LIANG Tian-yu et al (College of Life Science and Technology,Southwest University for Nationalities,Chengdu,Sichuan 610041)

【机构】 西南民族大学生命科学与技术学院四川省畜牧科学研究院

【摘要】 [目的]分析金堂黑山羊FSHR启动子的克隆和转录活性,为分子水平研究金堂黑山羊FSHR的可变剪接提供基础。[方法]从金堂黑山羊子宫中提取总的DNA,设计1对引物用于扩增FSHR启动子片段,并进行测序和同源性分析。将克隆得到的FSHR启动子片段替换CMV启动子构建pcFSHRB2表达载体,分别将pcFSHRB1和pcFSHRB2表达载体转染到HEK293细胞中,用2mIU/mlFSH处理细胞,在处理后24、48h分别检测环磷酸腺苷(cAMP)的产量,用以分析FSHR的转录活性。[结果]克隆得到的FSHR启动子序列与鸡和家鼠的同源性分别为34.2%和41.6%,推测其转录起始位点为-576bp处,其上游含有2个TATA-box、4个CAAT-box、1个E-box和1个W1-box。所构建的pcFSHRB2和pcFSHRB1表达载体转染细胞后用FSH处理24和48h时产生的cAMP的量分别为299.5813、125.5281pmol/L和120.0571、109.9407pmol/L。[结论]金堂黑山羊的FSHR启动子是一个典型的Ⅱ型真核启动子,是一个强启动子。

【基金】 四川省畜禽水产育种攻关项目
【所属期刊栏目】 动物与饲料科学 (2010年09期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.09.120
  • 【分类号】S827
  • 【被引频次】6
  • 【下载频次】197
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