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牛瑟氏泰勒虫P23主要表面蛋白基因的克隆及原核表达

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【作者】 李文学李海峰金清洙

【Author】 LI Wen-xue et al(Agricultural Colleg of Yanbian University,Longjing,Jilin 133400)

【机构】 延边大学农学院吉林省延吉市动物卫生监督所

【摘要】 [目的]研究牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因的克隆及原核表达。[方法]采用PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫中国延边株P23基因片段,将扩增产物克隆入pMD18-T载体构建重组质粒pMD18-P23,经PCR、双酶切鉴定后测序;将目的基因片段亚克隆入表达载体pGEX-4T-1构建重组表达质粒pGEX-4T-P23,转化宿主菌BL21获得重组菌。通过对诱导条件的优化,根据SDS-PAGE确定表达蛋白的最佳表达条件;Western-blotting检测表达蛋白的反应原性。[结果]所克隆的牛瑟氏泰勒虫P23基因片段长507 bp,与牛瑟氏泰勒虫日本株P23基因的核苷酸同源性达99.4%,表达的融合蛋白大小约为46 ku;诱导时机以接种培养后2 h为最佳,诱导时间以6 h为最佳,诱导温度以34℃为最佳,0.008~1.000 mmol/L的IPTG对表达量的影响不大。Western blotting检测表明该蛋白具有较好的抗原性。[结论]为牛瑟氏泰勒虫病的免疫学诊断和预防等研究奠定了基础。

【基金】 吉林省科技发展计划项目(20050703-4)
【所属期刊栏目】 动物与饲料科学 (2010年16期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.16.143
  • 【分类号】S858.23
  • 【下载频次】54
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