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大鼠OSP-1启动子克隆与表达检测

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【作者】 于今非李明鸿谢琴刘庆友石德顺

【Author】 YU Jin-fei et al (Animal Reproduction Institute,Guangxi University,Nanning,Guangxi 530005)

【机构】 广西大学动物繁殖研究所

【摘要】 [目的]克隆大鼠卵巢特异性启动子(OSP-1)片段,并在细胞水平检测该启动子调控标记基因的组织特异性表达。[方法]参考已知大鼠OSP-1序列设计特异性引物,PCR扩增大鼠OSP-1启动子片段并与已公布的大鼠OSP-1序列进行比较。将OSP-1启动子定向克隆到去除CMV的pEGFP-N1载体,构建真核表达载体pOSP-1-EGFP-N1;重组质粒在脂质体LipofectamineTM2000介导下,分别转染水牛的颗粒细胞、乳腺上皮细胞和胎儿成纤维细胞,并于转染后12,24和48h在荧光显微镜下观察EGFP表达情况。[结果]OSP-1启动子扩增片段长480bp,与已公布的大鼠OSP-1序列的相似性达96%;应用启动子预测软件对所得序列分析表明,该扩增片段含有类似于TA-TAbox和CAATbox的核心启动顺式元件,并含有多个C/EBPbeta转录因子的结合位点;在颗粒细胞转染后12h可观测到绿色荧光表达,转染后24h荧光细胞增多,细胞形态均呈圆形、体积较大,48h荧光细胞数量骤减,且死细胞增多;在乳腺上皮细胞和胎儿成纤维细胞均未检测到EGFP基因表达。[结论]大鼠OSP-1启动子控制下的EGFP基因可在水牛颗粒细胞中特异表达,为构建水牛卵巢特异性表达转基因载体奠定了基础。

【关键词】 OSP-1启动子水牛卵巢特异表达
【基金】 农业部转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08007-003)资助
【所属期刊栏目】 动物与饲料科学 (2010年24期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.24.017
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】5
  • 【下载频次】115
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