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高产纤维素酶绿色木霉基因工程菌的构建

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【作者】 胡耀辉闫舟于寒松

【Author】 HU Yao-hui et al (College of Food Science and Engineering,Jilin Agricultural University,Changchun,Jilin 130118)

【机构】 吉林农业大学食品科学与工程学院

【摘要】 [目的]构建CBHⅡ基因过量表达的绿色木霉工程菌。[方法]根据绿色木霉cDNA序列设计合成引物,PCR扩增CBHⅡ基因序列,将完整的目的基因与表达载体pCAMBIA1302连接,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组质粒pCAMBIA1302-CBHⅠ。再将pCAM-BIA1302-CBHⅠ重组质粒与瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅱ(CBHⅡ)PcbhⅡ启动子片段连接,将潮霉素磷酸转移酶(hyg)基因片段插入PcbhⅡ启动子下游,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组表达质粒pCAMBIA1302-CBHⅡ。[结果]构建的重组表达质粒电转化后经SDS-PAGE电泳检测,绿色木霉纤维素酶CBHII基因在原宿主菌中成功过量表达,证实CBHⅡ基因在PcbhⅡ启动子控制下进行高效表达。[结论]为高产纤维素酶系的工业化菌株构建奠定基础。

【基金】 吉林省科技厅重点攻关项目
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2010年25期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.25.045
  • 【分类号】Q789
  • 【被引频次】10
  • 【下载频次】501
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