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实时荧光定量PCR检测对虾白斑综合症病毒方法的建立

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【作者】 程晓艳刘庆慧黄倢

【Author】 CHENG Xiao-yan et al(Ocean University of China,Qingdao,Shandong 266003)

【机构】 中国海洋大学农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室,中国水产科学院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学院黄海水产研究所

【摘要】 [目的]根据对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的保守序列,利用Primer5.0软件设计引物,建立了WSSV的荧光实时定量PCR检测体系。[方法]构建含有WSSV目扩增片段的质粒为标准品,进行定量PCR扩增,探索反应条件。[结果]确定了最佳退火温度(61℃)和最佳引物浓度(0.2μmol/L),标准品浓度在8.8×109~8.8×104个拷贝数之间有典型的"s"型扩增曲线,标准曲线中模板拷贝数(X)与Ct值的关系为Ct=-3.597lgX+42.547,相关系数R2=0.993。[结论]该检测方法特异性强,对传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)、肝胰腺细小病毒(HPV)没有扩增反应。

【基金】 国家自然科学基金项目(30871942);国家重点基础研究项目(2006CB101801);对虾行业专项(200803012)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2010年26期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.26.164
  • 【分类号】S945.4
  • 【被引频次】29
  • 【下载频次】414
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