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人SUMO1基因的真核表达载体构建及其RNA干扰靶点筛选

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【作者】 吴勇延肖亮单黎然宋振郭泽坤

【Author】 WU Yong-yan et al(College of Life Sciences,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100)

【机构】 西北农林科技大学生命科学学院第四军医大学航空航天医学系生理教研室

【摘要】 [目的]构建人SUMO1的真核表达载体,筛选SUMO1的有效干涉靶点。[方法]将SUMO1亚克隆至载体pCMV-HA中。寻找可能的干涉位点,合成上下游引物,退火后直接克隆入GFP-HU双启动子载体。用WesternBlot和细胞荧光的方法检测各载体对外源性SUMO融合蛋白表达的影响,其后检测对内源性SUMO1表达的敲降效果。[结果]构建的人SUMO1真核表达载体pCMV-HA-SUMO1测序正确。针对267、279、293、309、342、386等不同干涉靶点构建双启动子干扰载体,其中293位点的干涉载体在WesternBlot和荧光检测试验中均表现出稳定的敲降效果,抑制了SUMO1的表达。[结论]该研究成功构建了SUMO1的真核表达载体及具有明显敲降效果的干涉载体,可为后续研究奠定基础。

【关键词】 SUMO1RNA干涉双启动子载体
【基金】 国家自然科学基金面上项目(30870266)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2010年29期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.29.018
  • 【分类号】Q78
  • 【下载频次】150
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