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米黑根毛霉脂肪酶的克隆表达及发酵条件优化

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【作者】 张宇赵继伦杨博

【Author】 ZHANG yu et al(College of Biological Science and Engineering,South China University of Technology,Guangzhou,Guangdong 510006)

【机构】 华南理工大学生物科学与工程学院

【摘要】 米黑根毛霉脂肪酶RML是一种重要的工业用酶,具有非常广泛的应用前景。本研究将人工合成的RML基因rml克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建pPIC9K-rml诱导型表达载体。表达载体经线性化后转化巴斯德毕赤酵母GS115,并使用抗生素G418筛选、三丁酸甘油酯-MM板及PCR方法筛选阳性重组工程菌。工程菌发酵液经SDS-PAGE分析、三丁酸甘油酯板鉴定,表明脂肪酶RML在毕赤酵母中获得高效表达,且蛋白分子大小与预期一致。进一步优化了发酵条件,包括对培养基组分、诱导剂浓度和发酵温度等的优化。优化后的培养基组成为:甘油4.0%,(NH4)2SO45.000 g/L,CaSO40.465 g/L,K2SO49.100 g/L,MgSO4.7H2O7.450 g/L;培养条件为:pH值6.0,生长阶段温度30℃,诱导阶段采用22℃低温诱导,诱导期每24 h补加甲醇浓度为3%。优化后,发酵液中的RML活力最高达到116 U/ml,比优化前提高了3.14倍。

【基金】 The city Key Technologies R & D Program of Guangzhou(2009A1-E021)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2010年35期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.35.062
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】4
  • 【下载频次】267
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