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基于链替代扩增-纳米金比色直观检测单链核酸方法的研究

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【作者】 朱乾琨汤丹孙浩然焦虎平张玉静

【Author】 ZHU Qian-kun et al (College of Animal Science and Veterinary Medicine,Jilin University,Changchun,Jilin 130062)

【机构】 吉林大学畜牧兽医学院

【摘要】 [目的]将链替代扩增技术与核酸修饰纳米金积聚变色的光学特性相结合,设计了一种新型的直观检测3′端暴露单链核酸的方法,实现对单链核酸的高灵敏度检测。[方法]设计一条含有硫代修饰酶切位点的单链核酸(ZDNA),其酶切位点5′端是能将核酸修饰纳米金变色的Linker序列,3′端是能与Target单链核酸3′端完全互补的H序列。当无Target存在时,Linker会充分暴露,能使核酸修饰纳米金积聚呈现紫色;但是当Target存在时,会与H序列完全互补,作为ZDNA的引物进入链替代扩增循环,形成的新链不断与Linker序列互补,不能使核酸修饰纳米金积聚呈现红色,从而间接检测了Target单链核酸。[结果]通过一系列试验确定检测体系,具体为:40μl修饰纳米金溶液(0.52 nmol/L)加入10μl酶循环体系(ZDNA20 nmol/L,33 mmol/L Tris-HCl(pH值7.9);10 mmol/L MgCl2;66 mmol/LNaCl;0.5 mmol/LdNTP;0.1 mg/ml BSA;0.05 U/μl klenow;1 U/μl Hinc II),直观或紫外检测并绘制Target浓度与纳米金积聚程度的标准曲线,表明Target浓度在1~200 pmol/L的范围内呈现良好的线性关系,R2=0.946,最低检测限是1 pmol/L。[结论]链替代扩增-纳米金比色检测单链核酸方法简便、直观、成本低,与传统修饰纳米金比色检测DNA方法相比,灵敏度提高了104倍。

【基金】 国家自然科学基金项目(30471284,30871850);长春市科技计划项目(08KZ39)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2011年02期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.02.028
  • 【分类号】Q52-3
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】218
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