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苜蓿叶绿体DNA的提取及其Rbcl基因片段的克隆

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【作者】 朱海林刘秀明江莺杜美丽李巍李海燕李校堃

【Author】 ZHU Hai-lin et al(Ministry of Education Engineering Research Center of Bioreactor and Pharmaceutical Development,Jilin Agricultural University,Changchun,Jilin 130118)

【机构】 吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心吉林农业大学生命科学学院吉林农业大学中药材学院

【摘要】 [目的]获得高纯度的苜蓿叶绿体DNA(cpDNA)和Rbcl基因片段。[方法]采用改进的高盐低pH法分离和纯化苜蓿叶绿体DNA;利用叶绿体基因组进化中高度保守的特点,设计引物,从苜蓿叶绿体基因组中扩增Rbcl基因,利用生物学软件对测序结果进行分析。[结果]经检测分析,获得了产率较高和纯度较好的苜蓿叶绿体DNA,并用PCR方法扩增获得了1 130 bp的Rbcl基因片段。该基因片段有17个常用的限制性内切酶酶切位点,与烟草、水稻、菜豆、玉米、甘薯和甜菜中Rbcl基因核苷酸的同源性为85.6%~90.6%。[结论]为构建苜蓿叶绿体表达载体和通过叶绿体生物反应器生产药用蛋白等奠定了基础。

【关键词】 苜蓿叶绿体DNA提取Rbcl基因克隆
【基金】 国家“863”高新技术研究与发展计划项目生物反应器重大专项计划项目(2007AA100503);吉林省科技发展计划重点项目(20070922);吉林省科技厅“利用紫花苜蓿作为反应器生产抗菌肽的研究”(20100147);高等学校科技创新工程重大项目培育资金项目(70S018);吉林农业大学校内启动基金“抗菌肽转基因紫花苜蓿的表达研究”(201032)
【所属期刊栏目】 生物技术 (2011年22期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.22.182
  • 【分类号】S541.9
  • 【被引频次】8
  • 【下载频次】380
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