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抑制14-3-3ζ表达的siRNA及其重组腺相关病毒载体的构建

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【作者】 袁亚丽曹以诚高强杨磊

【Author】 YUAN Ya-li et al(School of Bioscience and Bioengineering,South China University of Technology,Guangzhou,Guangdong 518640)

【机构】 华南理工大学生物科学与工程学院

【摘要】 [目的]通过构建靶向14-3-3ζ的siRNA及其报告基因EGFP的重组腺相关病毒载体,包装出含有目标基因的腺相关病毒。[方法]设计靶向14-3-3ζ的siRNA,插入到psiRNA质粒H1启动子下游,Western-Blot检测siRNA的抑制效果。从psiRNA质粒上扩增H1-si-ζ基因表达单位亚克隆到AAV表达质粒AAV-MCS-EGFP的Mlu1酶切位点,构建重组质粒pAAV-14-3-3ζ-EGFP。重组质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper用磷酸钙法共转染AAV-293细胞制备重组病毒rAAV-14-3-3ζ-EGFP。重组病毒感染HT1080细胞,荧光显微镜检测病毒介导的EGFP表达。[结果]通过酶切鉴定和测序确定重组病毒载体pAAV-14-3-3ζ-EGFP已构建成功。病毒感染的细胞中检测到绿色荧光,表明重组病毒成功包装。[结论]成功包装出重组腺相关病毒AAV-14-3-3ζ-EGFP,为今后利用腺相关病毒载体进行14-3-3ζ相关的体内、外研究提供了试验基础。

【关键词】 14-3-3ζ腺相关病毒AAV-293细胞EGFPWestern-Blot
【所属期刊栏目】 动物科学·饲料科学 (2011年23期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.23.089
  • 【分类号】R346
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】93
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