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猪生长激素启动子的克隆及功能分析

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【作者】 阮楠张明军鞠辉明白立景赵为民

【Author】 RUAN Nan et al(Genetic Engineering Lab,Institute of Animal and Veterinary Medicine,Jilin University,Changchun,Jilin 130062)

【机构】 吉林大学畜牧兽医学院基因工程实验室中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

【摘要】 [目的]克隆猪生长激素启动子,确定其启动子核心序列和主要的顺式作用元件。[方法]根据NCBI上公布的序列设计引物,PCR扩增了猪生长激素5’端-1 821~+61 bp的序列,并通过移步缺失的方法,获得9段长短不一的启动子序列,将其分别构建到双荧光素酶表达载体pGL3-basic上。通过重组质粒瞬时转染大鼠垂体瘤细胞(GH3)、猪髋动脉血管内皮细胞(PIEC)和猪肾细胞(PK15)和转染后细胞荧光素酶活性的测定,检测这些5’末端缺失质粒在垂体及非垂体细胞中的相对转录活性。[结果]成功扩增了猪GH基因5’上游启动区1 882 bp的片段,并构建了9个pGL3-mGH promoter报告基因载体;双荧光素酶报告基因检测系统证实插入报告基因载体中的启动子具有非常强的细胞特异性。[结论]猪生长激素特异性在垂体细胞中表达,其最小启动子位于-110 bp以内,启动子区-218~-110 bp和-429~-218 bp间存在正向调控元件。

【关键词】 猪生长激素启动子基因表达调控
【基金】 国家转基因新品种培育重大专项(2008ZX08010-004-006);国家863计划(2008AA10Z143);国家自然科学基金资助项目(3C830080,30500359)
【所属期刊栏目】 动物科学·饲料科学 (2012年06期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.06.220
  • 【分类号】S828
  • 【下载频次】104
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