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SELEX技术中ssDNA文库PCR扩增条件的优化

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【作者】 曹立亭许李丽万向王秋菊马跃

【Author】 CAO Li-ting et al (Department of Veterinary Medicine, Rongchang Campus, Southwest University, Rongchang,Chongqing 402460)

【机构】 西南大学荣昌校区动物医学系

【摘要】 [目的]对SELEX技术中ssDNA文库的PCR扩增条件进行优化。[方法]采用L16(45)正交试验设计在4个水平上对影响单链随机DNA文库PCR反应体系的Mg2+浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶含量、引物浓度和随机单链DNA文库量5个重要因素进行了优化,同时对PCR反应的退火温度和循环次数进行了优化,确立最优反应体系和扩增程序。[结果]20μlPCR反应体系及反应程序中各因素优化组合为:10×Buffer2.0μl,随机ssDNA文库0.5ng,Mg2+2.5mmol/L,dNTP Mixture0.25mmol/L,上下游引物各0.6μmol/L,Taq DNA聚合酶1.5U;退火温度为68℃,最佳循环数为12。此反应系统下,随机ssDNA文库PCR扩增谱带清晰、稳定、特异性高。[结论]为SELEX技术中筛选到特异性更强的适配子奠定了基础。

【基金】 中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(XDJK2011C026);西南大学博士基金(09BSR04)
【所属期刊栏目】 生物技术 (2012年06期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.06.010
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】6
  • 【下载频次】275
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