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大肠杆菌NrfA蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备

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【作者】 何婷婷龚钢明高然

【Author】 HE Ting-ting et al(College of Life and Environmental Sciences,Shanghai Normal University,Shanghai 200234)

【机构】 上海师范大学生命与环境科学学院上海应用技术学院生物工程系浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所

【摘要】 [目的]克隆大肠杆菌NrfA基因,构建pET-28a(+)-NrfA表达载体,制备相应的多克隆抗体并对其进行鉴定。[方法]以大肠杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增得到NrfA基因编码区,构建pET-28a(+)-NrfA表达载体;经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白;再免疫新西兰雄兔,制备多克隆抗体;用ELISA方法检测抗体的效价,Western Blotting检测抗体的特异性。[结果]构建的表达载体pET-28a(+)-NrfA在大肠杆菌中诱导后可高效表达NrfA蛋白;免疫获得的多克隆抗体用ELISA检测,其效价为1∶204 900;经Western Blotting分析,抗体的特异性较好。[结论]成功克隆大肠杆菌的NrfA基因,并构建了其表达载体,制备的NrfA多克隆抗体具有较高的效价和良好的特异性,为研究细菌有关NrfA奠定了基础。

【关键词】 NrfA基因原核表达多克隆抗体
【所属期刊栏目】 生物技术 (2012年10期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.10.138
  • 【分类号】S182
  • 【下载频次】110
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