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牛轮状病毒结构蛋白VP4基因的真核表达

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【作者】 王丹宋玲玲王洪梅杨宏军王立群何洪彬

【Author】 WANG Dan et al(College of Life Science,Northeast Agricultural University,Harbin,Heilongjiang 150030)

【机构】 东北农业大学生命科学学院山东省农业科学院奶牛研究中心

【摘要】 [目的]克隆获得牛轮状病毒VP4全基因,并进行真核表达。[方法]采用RT-PCR技术,从牛轮状病毒总RNA中扩增出VP4基因,将其重组到含有Flag标签的pcDNA3.1(+)载体中,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,通过Lipofect2000TM转染293T细胞,细胞增殖后经RT-PCR和Western Blot检测VP4基因的表达。[结果]获得了VP4基因的阳性重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-VP4;转染293T细胞后经RT-PCR和Western Blot检测表明,该基因的重组表达载体构建正确,可在293T细胞内瞬时表达。[结论]VP4基因的重组真核表达载体构建成功并可在真核表达细胞内表达,该研究为VP4基因的DNA疫苗的研发及应用奠定了基础。

【关键词】 牛轮状病毒VP4基因克隆真核表达
【基金】 国家自然科学基金项目(31072160);国家转基因重大专项(2009ZX08007-006B);济南市高校院所自主创新计划项目(201004027,201102034);BRV强毒株的致弱研究项目(Y2009-D56)
【所属期刊栏目】 动物科学·饲料科学 (2012年16期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.16.005
  • 【分类号】S852.653
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】81
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