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重组NADH氧化酶对乳酸脱氢酶乳酸氧化活性的影响

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【作者】 赵蕊霍贵成

【Author】 ZHAO Rui et al(Key Laboratory of Dairy Science of Ministry of Education,Northeast Agriculture University,Harbin,Heilongjiang 150030)

【机构】 东北农业大学乳品科学教育部重点实验室

【摘要】 [目的]考察当存在其他利用NADH途径时,发酵型乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)催化乳酸氧化能力的改变。[方法]PCR扩增乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)中生成H2O的NADH氧化酶基因noxE,将其连接至表达载体并在大肠杆菌中过量表达;对亲和纯化的产物进行SDS-PAGE分析、光谱扫描和活性测定,考察纯化产物是否具有生物学活性;以2,4-二硝基苯肼法测定乳酸脱氢酶的乳酸氧化活性,考察添加NoxE重组蛋白对其活性的影响。[结果]重组NoxE蛋白是种黄素蛋白,具明显的生物学活性,说明noxE表达载体构建成功;添加NoxE后,LDH的乳酸氧化活性提高了3.84倍。[结论]在NADH经呼吸链代谢掉的生理条件下,LDH催化乳酸氧化的能力会明显提高。

【关键词】 乳酸菌乳酸脱氢酶NADH氧化酶
【基金】 国家863项目(2011AA100902);国家自然科学基金(31171717和30972131)
【所属期刊栏目】 生物技术 (2013年05期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.05.002
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】170
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