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猪脑中硫氧还蛋白还原酶的纯化与表征

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【作者】 陈文波邵方元刘晓王一飞刘忠

【Author】 CHEN Wen-bo;Guangzhou Biomedicine Research and Development Center,Guangdong Provincial Key Laboratory of Bioengineering Medicine,National Engineering Research Center of Genetic Medicine,Jinan University;

【机构】 暨南大学,基因工程药物国家工程研究中心,广东省生物工程药物重点实验室,生物医药研究开发基地广东药学院,广东省生物活性药物研究重点实验室

【摘要】 [目的]用新的方法从猪脑中提取纯化硫氧还蛋白还原酶(TrxR)并对其进行表征。[方法]通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow弱阴离子交换凝胶色谱柱层析、Blue-Sepharose亲和色谱柱层析、Resource Q强阴离子交换色谱柱层析和Superdex 200 prep grade凝胶过滤色谱柱层析等方法,从猪脑中分离并纯化TrxR。采用聚丙烯酰胺电泳法、等电聚焦法、DTNB还原法和胰岛素还原法对TrxR的性质进行表征。[结果]从猪脑中分离并纯化出TrxR,其纯度大于99%,是酶粗提液的6 000倍,最终产率为13.9%。猪脑TrxR的分子量为56.0 kD,等电点为5.0。以DTNB为底物测得其K m和k cat值分别为62.9μmol/L和467 min-1,以硫氧还蛋白为底物测得其K m和k cat值分别为3.9μmol/L和2 813 min-1。[结论]用新的方法从猪脑中纯化得到较高纯度的TrxR,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。

【关键词】 硫氧还蛋白还原酶纯化
【基金】 国家自然科学基金青年科学基金项目(81001449);广东省自然科学基金面上项目(S2012010008494)
【所属期刊栏目】 动物科学·饲料科学 (2013年18期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.18.119
  • 【分类号】S852.2
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】93
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