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抗ICOSL核糖体展示单链抗体库的构建

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【作者】 严浩王芳毛伟平王文倩孟素芳邵峦峦刘小綪

【Author】 YAN Hao;Jiangsu Province Key Laboratory of Molecular and Medical Biotechnology,College of Life Sciences,Nanjing Normal University;

【机构】 南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学重点实验室

【摘要】 [目的]构建出鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库。[方法]通过RT-PCR从人B淋巴瘤细胞Daudi的总RNA中扩增出ICOSL胞外区基因,并将此基因插入到原核表达载体pET28a中进行表达。以表达纯化的ICOSL蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾脏提取总RNA,通过RT-PCR扩增小鼠的重链可变区和Linker(VH-linker)序列,以及轻链可变区和Linker(Vκ-linker)序列。经重组PCR将两段基因连接起来,将VH/κ与pMD19-T载体链接产物转化E.coli DH 5α,PCR鉴定并测序。[结果]VH和κ链得到正确的扩增,长度分别为421和689 bp,VH/κ连接产物正确,连接产物长度为1 079 bp。[结论]所采用的引物及反应条件能够扩增出目的基因,成功构建了鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库,为进行核糖体展示体外筛选抗ICOSL特异性单链抗体奠定基础。

【所属期刊栏目】 生物技术 (2013年33期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.33.095
  • 【分类号】R392
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】47
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