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拟南芥中Fibrillarin基因的克隆·表达·纯化及与ak6蛋白相互作用研究

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【作者】 李然田兆丰张飞云

【Author】 LI Ran;College of Life Science,Capital Normal University;

【机构】 首都师范大学生命科学学院北京市农林科学院植物保护环境保护研究所

【摘要】 [目的]研究拟南芥中Fibrillarin基因的克隆、表达及纯化,并探索其与ak6蛋白的相互作用。[方法]利用pGEX-6P-1与Fibrillarin基因构建重组表达质粒,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,运用同样方法构建PET-28a-ak6原核表达质粒,获得His-ak6融合蛋白,并运用体外pull down技术验证二者的相互作用。[结果]在温度为37℃、诱导时间为16~20 h、IPTG浓度为0.5mmol/L时,fibrillarin蛋白的纯化浓度最高。试验成功获得了符合标准的RNA,并获得了与预期片段大小相符的清晰的目的条带;pulldown试验结果表明,拟南芥中fibrillarin蛋白与ak6蛋白具有相互作用。[结论]拟南芥ak6突变体植株可能由于ak6的缺失影响了rRNA前体的加工,从而抑制核糖体的合成,进而阻碍拟南芥茎的生长,使植株表现明显的矮小症状。

【关键词】 拟南芥fibrillarin蛋白ak6
【基金】 国家自然科学基金项目(31071075)
【所属期刊栏目】 生物技术 (2014年01期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2014.01.001
  • 【分类号】Q943.2
  • 【下载频次】53
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