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偏肿革裥菌Lg-mnp1基因克隆及表达研究

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【作者】 闫洪波池玉杰吴书景

【Author】 YAN Hong-bo;CHI Yu-jie;School of Forestry,Northeast Forestry University;

【机构】 东北林业大学林学院

【摘要】 [目的]研究偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况。[方法]根据白腐菌锰过氧化物酶(MnP)基因保守序列设计引物,采用PCR、RACE及染色体步移等方法,克隆偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因(GenBank登录号JQ327834),进行蛋白序列分析,并通过双酶切的方法获得重组质粒,将该重组质粒电转化至巴斯德毕赤酵母中进行异源表达。[结果]获得偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因,命名为Lg-mnp1。蛋白序列分析表明Lg-MnP1含有4个二硫键属于短MnP,预测成熟蛋白分子量为35.94kD,pI为4.43。通过双酶切的方法将Lg-mnp1的开放阅读框(ORF)序列连接到pPICZB载体上,获得重组质粒pPICZB/Lg-mnp1,转化子经PCR验证后,在BMMY培养基中甲醇诱导培养,在未添加血红素的培养液中MnP胞外酶活在72 h达到最高为7 U/L,表明Lg-mnp1已被转化至毕赤酵母中并可诱导表达。[结论]该方法对偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况进行研究,为偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的进一步应用提供了依据。

【基金】 国家自然科学基金项目(30671700)
【所属期刊栏目】 生物技术 (2014年11期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2014.11.005
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】87
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