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玉米和拟南芥的原生质体制备及瞬时表达体系的研究

赵苏州1,2卢运明3张占路3赵杨敏3王磊1,2

1. 西南科技大学生命科学与工程学院2. 中国农业科学院生物技术研究所3. 深圳农科集团

摘要:[目的]优化玉米和拟南芥原生质体的制备条件及瞬时表达体系。[方法]以不同时期玉米叶片和拟南芥为材料分离原生质体,通过对不同酶浓度,解离时间和渗透压的研究,优化最佳分离原生质体体系;原生质体再经PEG介导的转化,通过GFP基因表达百分比鉴定原生质体活性和转化效率。[结果]玉米和拟南芥原生质分离的最佳条件为:纤维素酶1.5%,离析酶0.5%;拟南芥酶解4 h,甘露醇浓度0.4 mol/L;玉米酶解6 h,甘露醇浓度0.45~0.50 mol/L。最佳生长时期为:拟南芥6~8片叶;玉米二片叶。用去内毒素质粒经PEG(玉米30%PEG,拟南芥40%PEG)诱导转化置于黑暗下培养,原生质体活性和转化效率较高,原生质体中可以观察到明显的GFP荧光。[结论]玉米和拟南芥原生质体的制备受酶浓度,解离时间和渗透压的影响,在原生质体转化过程中,质粒DNA纯度,PEG浓度等是影响转化效率的关键因素,与拟南芥原生质体相比玉米原生质体要稳定性差一些。
  • DOI:

    10.13989/j.cnki.0517-6611.2014.12.002

  • 专辑:

    农业; 理工A(数学物理力学天地生)

  • 专题:

    生物学

  • 分类号:

    Q943

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