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拟南芥CDR6基因过表达载体构建及过量表达植株筛选鉴定

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【作者】 董万春樊婷婷阳立波江海坤张其安方凌倪娇娇管灵霞曹树青

【Author】 DONG Wan-chun;FAN Ting-ting;YANG Li-bo;CAO Shu-qing;School of Biotechnology and Food Engineering,Hefei University of Technology;

【机构】 合肥工业大学生物与食品工程学院安徽省农业科学院园艺研究所

【摘要】 [目的]以拟南芥为材料克隆CDR6基因,构建CDR6基因的过量表达载体并筛选鉴定获得过表达植株。[方法]提取拟南芥mRNA,反转录成c DNA,并以此为模板克隆CDR6基因CDS全长,通过限制性内切酶切割、T4DNA连接酶连接,将CDR6基因CDS全长连接到带有35S强启动子的p XB094载体上;然后转化至Trans1-T1感受态细胞中,菌落PCR鉴定阳性单克隆并测序确认。将重组质粒转化至根瘤农杆菌GV3101菌株,通过浸花法侵染拟南芥野生型植株,通过抗性筛选和鉴定获得预期的转基因植株。[结果]菌落PCR鉴定和测序结果表明CDR6基因已成功构建至p XB094载体;通过抗性筛选并鉴定获得了过量表达阳性植株。[结论]筛选和鉴定获得的过量表达植株为研究CDR6基因的分子功能奠定了基础。

【基金】 安徽省自然科学基金青年基金项目(1308085QC56);安徽省科技攻关项目(1201a0301009)
【所属期刊栏目】 生物技术 (2015年13期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2015.13.158
  • 【分类号】Q943.2
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】342
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