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摘要:[目的]建立玉米内州萎蔫病菌的快速恒温扩增检测技术。[方法]利用Gen Bank公布的玉米内州萎蔫病菌(Clavibacter michiganensis subsp.nebraskensis,Cmn)16S-23S序列设计LAMP(loop-mediated isothermal amplification)引物,建立玉米内州萎蔫病菌LAMP检测体系,并对反应条件进行了优化。[结果]LAMP在内引物、环化引物和外引物比为6∶4∶1(30 pmol∶20 pmol∶5 pmol)的25μl体系下64℃反应30 min为最佳反应条件,且LAMP引物能从供试的7种菌株中特异性扩增出Cmn梯度性条带。以玉米内州萎蔫病菌基因组和菌悬液梯度稀释液为模板检测LAMP体系的灵敏度,结果显示,LAMP检测体系针对基因组和菌悬液的灵敏度分别达到了50 fg和3.6CFU,比普通PCR灵敏度高100倍。[结果]LAMP检测体系简单、快速、灵敏度高、特异性好,在玉米内州萎蔫病菌检测方面潜力巨大。
  • DOI:

    10.13989/j.cnki.0517-6611.2015.22.008

  • 专辑:

    农业

  • 专题:

    植物保护

  • 分类号:

    S435.131.4

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