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佛手瓜鲨烯合酶基因克隆及酶分子结构分析

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【作者】 苏何玲肖雅伦谭燕莲梁斌谷云艳刘永明吴耀生

【Author】 SU He-ling;XIAO Ya-lun;TAN Yan-lian;WU Yao-sheng;Department of Biochemistry and Molecular Biology,Guangxi Medical University;Key Laboratory of Medicinal Biotechnology,Guilin Medical University;

【机构】 广西医科大学生物化学与分子生物学教研室桂林医学院医药生物技术重点实验室

【摘要】 [目的]克隆佛手瓜鲨烯合酶(SQS)基因,并基于克隆的SQS序列分析该酶的分子结构,为佛手瓜生物活性成分的利用提供理论依据。[方法]根据SQS基因5’末端保守序列和3’race方法扩增的佛手瓜SQS基因3’末端序列设计佛手瓜SQS基因克隆引物。扩增的佛手瓜SQS基因片段插入p GEM-T Easy Vector后经DNA测序。应用生物信息学方法分析克隆序列的开放阅读框架(ORF)、酶蛋白的疏水性/亲水性和蛋白质磷酸化位点,预测酶蛋白的二级结构、结构域、三级结构和跨膜区。以布朗葡萄藻为outgroup,应用MEGA 5.0进行UPGMA算法构建系统树,并进行1 000次的Bootstrap测试。[结果]佛手瓜SQS由417氨基酸残基构成,等电点为6.983。构象预测提示该酶二级结构以α螺旋为主,是一种只有三级结构的单体酶,其活性中心是主要由几个α螺旋围绕形成的穴状结构,酶蛋白肽链中具有1个跨膜区。结构域分析表明SQS属于异戊二烯合酶家族。磷酸化位点分析显示该酶共有17个磷酸化位点,其中,S48位于与酶活性中心相关模体中,而S196为陆生植物SQS基因的正选择位点。以佛手瓜SQS基因ORF序列构建系统发生树得到的系统发生分类结果与形态学分类结果一致。[结论]佛手瓜SQS是由417氨基酸残基构成的单体酶,具有1个跨膜区和17个磷酸化位点,其中,S48和S196可能是佛手瓜SQS酶活性调节的关键性磷酸化位点。

【关键词】 佛手瓜鲨烯合酶基因克隆结构分析
【基金】 国家自然科学基金项目(31260069);广西高等学校优秀中青年骨干教师培养工程资助项目
【所属期刊栏目】 生物技术 (2016年32期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2016.32.048
  • 【分类号】S642.9
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】75
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