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ERO1α慢病毒过表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中稳定表达

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【作者】 戴安娜胡佳慧屈玉杏刘婉洋许显玉陈风雷

【Author】 DAI An-na;HU Jia-hui;QU Yu-xing;College of Veterinary Medicine,Yangzhou University;

【通讯作者】 陈风雷;

【机构】 扬州大学兽医学院江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

【摘要】 [目的]构建小鼠ERO1α基因慢病毒过表达载体,并筛选其在RAW264.7细胞中稳定表达。[方法]利用PCR方法扩增ERO1α基因的CDS区并测序;将目的片段亚克隆到慢病毒过表达载体pCD513B-1上,构建pCD513B-ERO1α慢病毒过表达载体;通过病毒包装产生慢病毒并转导RAW264.7细胞;转导后的细胞进行嘌呤霉素抗性筛选,获得稳定表达的细胞;利用RT-qPCR和Western blot方法检测ERO1α的表达效果。[结果]ERO1α慢病毒过表达载体构建成功,病毒滴度为5×10~6~10×10~6 TU/mL;慢病毒成功转导RAW264.7细胞并且稳定高表达。[结论]成功构建ERO1α慢病毒过表达载体,并在RAW264.7细胞中稳定高表达,为进一步研究ERO1α在免疫系统中的功能提供了技术支持。

【关键词】 慢病毒ERO1α过表达RAW264.7细胞
【基金】 国家自然科学基金项目(31702298);中国博士后科学基金项目(2017M621843);江苏省自然科学基金项目(BK20170498);江苏省高校自然科学研究计划资助项目(17KJD230002);江苏高校优势学科建设工程资助项目;扬州大学大学生科创基金项目(x20180623)
【所属期刊栏目】 动物科学·生物技术 (2019年02期)
  • 【分类号】Q78
  • 【下载频次】131
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