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柽柳cpSSR-PCR反应体系的建立和优化

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【作者】 张如华张连梅

【Author】 ZHANG Ru-hua;ZHANG Lian-mei;College of Life Sciences, Linyi University;Library of Linyi University;

【机构】 临沂大学生命科学学院临沂大学图书馆

【摘要】 [目的]建立并优化柽柳cpSSR-PCR反应体系和反应条件。[方法]对影响PCR反应的5个变量(Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、模板DNA浓度)进行L16(45)正交试验设计,并对引物退火温度进行梯度筛选。[结果]最优反应体系:Mg2+ 2.0 mmol/L、dNTPs 0.125 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.25 U、引物0.25μmol/L、模板DNA 20 ng,共10μL。反应程序:94℃预变性4 min;94℃30 s,引物退火温度30 s,72℃30 s,30个循环;72℃延伸10 min。[结论]该反应体系成功扩增1个柽柳天然群体的23个个体,为柽柳群体扩散路线的确定奠定基础。

【关键词】 柽柳叶绿体微卫星反应体系正交试验
【基金】 临沂大学博士科研启动基金项目(2015A0031)
【所属期刊栏目】 动物科学·生物技术 (2019年09期)
  • 【分类号】S793.5
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