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青藏高原放牧家畜小肠结肠炎耶尔森氏菌LAMP检测方法的建立及应用

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【作者】 蔡其刚唐一波高小龙仝丽娜赵静张红见

【Author】 CAI Qi-gang;TANG Yi-bo;GAO Xiao-long;Academy of Animal Science and Veterinary Medicine,Qinghai University;College of Agriculture and Animal Husbandry,Qinghai University;

【通讯作者】 张红见;

【机构】 青海大学畜牧兽医科学院青海大学农牧学院

【摘要】 为了建立特异性、敏感性和适用性强的LAMP检测方法,采用分子生物学方法,根据GenBank数据库中该细菌的outL基因,进行了多序列比对和保守区域确定。根据其保守序列,在线设计和筛选了一套LAMP引物。温度优化及特异性和敏感性验证后建立了检测该病菌的LAMP检测方法,并对青藏高原放牧牛、羊临床粪便样品进行了检测。结果表明,LAMP检测方法的最适温度为63℃;检测其与大肠杆菌、沙门氏菌、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌及蜡样芽胞杆菌无交叉反应;检测下限为100 fg目的基因;利用建立的方法检测了208份放牧牦牛、藏羊粪便DNA样品,共检测到26份阳性样品,阳性率为12.5%。这表明成功建立了一种检测该病的特异性、敏感性和适用性强的LAMP检测方法。

【基金】 国家自然科学基金项目(31560695,31560701);青海省农牧厅项目(NMSY-2016-07,NMSY-2018-03)
【所属期刊栏目】 动物科学·生物技术 (2019年24期)
  • 【分类号】S852.61
  • 【下载频次】66
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