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鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒二重PCR检测方法的建立

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【作者】 李丹谢芝勋李孟罗思思谢丽基张民秀黄娇玲范晴王盛谢志勤邓显文曾婷婷张艳芳

【Author】 LI Dan;XIE Zhi-xun;LI Meng;Guangxi Veterinary Research Institute, Guangxi Key Laboratory of Veterinary Biotechnology;

【通讯作者】 谢芝勋;

【机构】 广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室

【摘要】 [目的]建立一种能够同时诊断鸡细小病毒(chincken parvovirus,ChPV)和H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的检测方法。[方法]根据GenBank中已发表的ChPV NS基因、H9亚型AIV HA基因的保守序列,分别设计多对引物,并通过一系列不同组合对温度和反应体系的调整试验,最终筛选出2对最佳特异性引物组合,建立了ChPV和AIV二重PCR检测方法用于ChPV和H9亚型AIV的检测。[结果]特异性和敏感性的试验结果表明,建立的二重PCR方法特异性良好,可以在一管PCR反应同时检测ChPV和H9亚型AIV。针对ChPV NS基因和H9亚型AIV HA基因的扩增片段大小分别为558和367 bp,其他常见的禽病病原体均未见阳性反应;该法对ChPV和H9亚型AIV的检测下限均为5×10~4拷贝/μL质粒;临床样品检测结果表明,对140份临床样品检测结果与AIV分离测序及ChPV PCR阳性产物测序结果完全一致。[结论]建立的ChPV和H9亚型AIV二重PCR检测方法不仅特异性良好,而且检测的灵敏度高,对ChPV和H9亚型AIV的监测及有效防控具有重要意义。

【基金】 广西科技基地和人才专项项目(桂科AD17195083);广西科技重大专项(桂科AA17204057);“广西八桂学者”专项(2019-79);国家“万人计划”领军人才专项(2016-37-88)
【所属期刊栏目】 动物科学·生物技术 (2020年09期)
  • 【分类号】S852.65
  • 【下载频次】59
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