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电离辐射对沉默ATRX的HeLa细胞DNA损伤修复的影响已勘误

【作者】 唐庚史耀挺孔维轩柯希扬李成想邱禹淇于雷杨艳明王志成

【Author】 TANG Geng;SHI Yaoting;KONG Weixuan;KE Xiyang;LI Chengxiang;QIU Yuqi;YU Lei;YANG Yanming;WANG Zhicheng;NHC Key Laboratory of Radiobiology,School of Public Health,Jilin University;Department of Oneology,General Hospital;Department of Radiotherapy,Second Hospital,Jilin University;

【通讯作者】 杨艳明;王志成;

【机构】 吉林大学公共卫生学院国家卫生健康委员会放射生物学重点实验室黑龙江省农垦总局总医院肿瘤四科吉林大学第二医院放疗科

【摘要】 目的:靶向沉默宫颈癌HeLa细胞中α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色相关蛋白(ATRX),检测电离辐射对ATRX、γH2AX和Rad51蛋白表达及γH2AX和Rad51焦点数的影响,探讨ATRX参与辐射后HeLa细胞DNA损伤修复的作用。方法:3条ATRX-shRNA和阴性对照(Control-shRNA)的慢病毒载体转染293T细胞,收集慢病毒并感染HeLa细胞,利用puromycin筛选获得稳定沉默ATRX的细胞系,分别命名为shA1-HeLa、shA2-HeLa、shA3-HeLa和shCon-HeLa,采用Western blotting法检测沉默ATRX效率以及电离辐射后ATRX、γH2AX和Rad51蛋白的表达,采用免疫荧光技术观察shCon-HeLa和shA1-HeLa组中γH2AX和Rad51焦点并计数其数量。结果:shCon-HeLa细胞中可见ATRX蛋白表达,而shA1-HeLa、shA2-HeLa和shA3-HeLa细胞中均无ATRX蛋白表达,表明沉默效率较高。在2和8Gy剂量照射后1、6和24h,shConHeLa组ATRX蛋白表达量逐渐升高,24h时表达量最高,且8Gy照射后1、6和24h表达量均较高。4Gy照射后0~6h,与shCon-HeLa组比较,shA1-HeLa组γH2AX焦点数在1h明显升高(P<0.05),而后逐渐降低,但在6h焦点数仍明显高于shCon-HeLa组(P<0.01);Rad51焦点数与γH2AX焦点数变化相一致,与shCon-HeLa组比较,shA1-HeLa组Rad51焦点数在1h明显升高(P<0.05),在6h时shA1-HeLa焦点数仍明显高于shCon-HeLa组(P<0.01)。4Gy照射后0~16h,shA1-HeLa组细胞中γH2AX和Rad51蛋白表达量均较shCon-HeLa组增加。结论:成功获得稳定沉默ATRX的HeLa细胞模型,电离辐射可诱导ATRX蛋白表达量增加,且沉默ATRX的HeLa细胞中γH2AX和Rad51焦点数及蛋白表达量均高于对照组,提示ATRX参与了辐射诱导的DNA损伤修复过程。

【基金】 国家自然科学基金资助课题(81803218);吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题(20180101305JC,20190201214JC);吉林省卫计委青年科技骨干培养计划项目资助课题(2017Q023)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2019年05期)
  • 【DOI】10.13481/j.1671-587x.20190501
  • 【分类号】R737.33;R730.55
  • 【下载频次】91
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