17β-雌二醇对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中Ca²⁺通道的作用

【作者】 冷冰； 王大麟； 郑淑云； 韩梅； 吴震宇； 裴颖； 薛昊罡；

【Author】 LENG Bing;WANG Dalin;ZHENG Shuyun;HAN Mei;WU Zhenyu;PEI Ying;XUE Haogang;Department of Orthopedics,Affiliated Hospital,Beihua University;Department of Ophthalmology,Second Hospital,Jilin University;

【通讯作者】 裴颖;薛昊罡;

【机构】 北华大学附属医院骨外科； 吉林大学第二医院眼科；

【摘要】 目的:观察17β-雌二醇（17β-E2）对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）成骨分化过程中钙离子(Ca²⁺)通道的影响,阐明17β-E2对MSCs促成骨分化的作用机制。方法:采用密度梯度离心法和贴壁筛选法分离出MSCs,连续传代3次,进行成骨细胞的诱导分化。将MSCs分为对照组[单纯成骨细胞培养基（OBM）培养]和不同剂量17β-E2组(在OBM中分别添加0.1、1.0、10.0和100.0pmol·L^-1 17β-E2)。成骨诱导14d,各组细胞经Fluo-3/AM染色后,利用激光扫描共聚焦显微镜测定平均荧光强度（MFI）,以MFI代表Ca²⁺水平。应用全细胞膜片钳技术记录不同条件下的全细胞Ca²⁺电流。结果:采用密度梯度离心法和贴壁筛选法成功分离MSCs。MSCs细胞呈成纤维细胞样,核呈椭圆形,细胞核内可见核仁。传代培养的MSCs生长旺盛,保持原代细胞的形态特征。随着17β-E2浓度的增加,各组细胞的Ca²⁺水平也逐渐增强,以100.0pmol·L^-1 17β-E2组最为明显。与对照组比较,10.0和100.0pmol·L^-1 17β-E2组的MSCs成骨分化过程中Ca²⁺水平和Ca²⁺电流峰值明显升高（P<0.05或P<0.01）,0.1和1.0pmol·L^-1 17β-E2组Ca²⁺水平和Ca²⁺电流峰值差异无统计学意义（P>0.05）。结论:密度梯度离心法和贴壁筛选法分离所得细胞为大鼠MSCs。17β-E2通过增强MSCs Ca²⁺通道的开放,增强Ca²⁺内向电流发挥促进成骨形成作用,并呈剂量依赖性。更多还原