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一种高效稳定的磷酸钙转染293T细胞方法的建立及评价

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【作者】 华进程志彬林春霖戴起宝朱广伟

【Author】 HUA Jin;CHENG Zhibin;LIN Chunlin;DAI Qibao;ZHU Guangwei;Department of Gastrointestinal Surgery 2 Section,First Affiliated Hospital,Fujian Medical University;Key Laboratory of Gastrointestinal Cancer,Ministry of Education,Fujian Medical University;

【通讯作者】 朱广伟;

【机构】 福建医科大学附属第一医院胃肠外科二区福建医科大学消化道恶性肿瘤教育部重点实验室

【摘要】 目的:探讨2种磷酸钙转染法转染293T细胞的效果,建立一种实现高效稳定磷酸钙转染293T细胞的方法。方法:荧光显微镜观察采用2种磷酸钙转染方法 (传统磷酸钙转染法和改良磷酸钙转染法)转染pCDHGFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞的转染效率。采用Real-time PCR法和Western blotting法分别检测2种磷酸钙转染方法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞后,肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)mRNA和flag蛋白表达水平。结果:荧光显微镜下观察,与传统磷酸钙转染法比较,改良磷酸钙转染法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48h后的转染效率明显升高(P<0.01);Real-time PCR法和Western blotting法检测,与传统转染方法比较,磷酸钙转染改良法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48h后,TRAF6mRNA和flag蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论:本研究建立的改良磷酸钙转染方法是一种高效、稳定的DNA转染方法。

【基金】 国家自然科学基金资助课题(81702424,81872364);国家卫健委临床重点专科建设项目(普通外科)资助课题(2013);福建省科技厅自然科学基金资助课题(2018J05127);福建省卫健委中青年骨干项目资助课题(2018-ZQN-46);福建省教育厅中青年教师教育科研项目资助课题(JAT170239)
【所属期刊栏目】 方法学 (2019年05期)
  • 【DOI】10.13481/j.1671-587x.20190535
  • 【分类号】R346
  • 【下载频次】77
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