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Tribbles同源蛋白3抑制人脂肪间充质干细胞成脂向分化

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【作者】 白向松吕珑薇周永胜

【Author】 BAI Xiang-song;LV Long-wei;ZHOU Yong-sheng;Department of Prosthodontics,Peking University School and Hospital of Stomatology & National Clinical Research Center for Oral Diseases & National Engineering Laboratory for Digital and Material Technology of Stomatology & Beijing Key Laboratory of Digital Stomatology;

【通讯作者】 吕珑薇;

【机构】 北京大学口腔医学院·口腔医院修复科国家口腔疾病临床医学研究中心口腔数字化医疗技术和材料国家工程实验室口腔数字医学北京市重点实验室

【摘要】 目的:研究Tribbles同源蛋白3(Tribbles pseudokinase 3,TRIB3)在人脂肪间充质干细胞(human adiposederived mesenchymal stem cells,h ASCs)成脂分化中的调控作用,为提高h ASCs成脂向分化能力、并为基于h ASCs的脂肪组织工程与软组织缺损修复提供新靶点与新思路。方法:通过慢病毒转染建立TRIB3稳定敲低(TRIB3敲低组)和过表达(TRIB3过表达组)的h ASCs细胞系,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白质印迹实验(Western blot)检测慢病毒转染h ASCs的转染效率和效果。通过油红O染色和定量、qRT-PCR等实验方法,检测敲低、过表达TRIB3对h ASCs成脂分化能力的影响。结果:TRIB3敲低慢病毒转染后,TRIB3敲低组h ASCs中TRIB3 mRNA表达量较对照组下降84.3%(P <0.01),TRIB3蛋白表达也显著下降,表明成功构建了TRIB3敲低的h ASCs细胞系; TRIB3过表达慢病毒转染后,TRIB3过表达组TRIB3mRNA表达量较对照组增高约1.6倍(P <0.01),TRIB3蛋白表达也显著升高,表明成功构建了TRIB3过表达的h ASCs细胞系。在此基础上,油红O染色显示,TRIB3敲低的h ASCs成脂诱导后胞浆内红色脂滴明显增多,定量结果表明TRIB3敲低组油红O着色较对照组显著增多(P <0.01)。与之相反,TRIB3过表达的h ASCs成脂诱导后胞浆内红色脂滴明显减少,定量结果表明TRIB3敲低组油红O着色较对照组显著减少(P <0.01)。qRT-PCR结果显示,敲低TRIB3的h ASCs成脂诱导后,成脂分化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferatoractivated receptorγ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)和白细胞分化抗原36(cluster of differentiation 36,CD36) mRNA水平显著升高(P <0.01); TRIB3过表达的h ASCs成脂诱导后成脂分化相关基因PPARγ、CD36和脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase,LPL) mRNA水平明显下降。结论:TRIB3能够调控h ASCs成脂分化能力,敲低TRIB3促进h ASCs成脂分化,过表达TRIB3抑制h ASCs成脂分化。

【基金】 国家自然科学基金(31600787);中国科协青年人才托举项目(2015QNRC001);北京大学口腔医院青年基金(PKUSS20150107)~~
【所属期刊栏目】 论著 (2020年01期)
  • 【DOI】10.19723/j.issn.1671-167X.2020.01.001
  • 【分类号】R329.2
  • 【下载频次】62
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