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根尖牙乳头干细胞摄取外泌体的介导途径

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【作者】 高晓敏邹晓英岳林

【Author】 GAO Xiao-min;ZOU Xiao-ying;YUE Lin;Department of Cariology and Endodontology,Peking University School and Hospital of Stomatology & National Clinical research Center for Oral Diseases & National Engineering Laboratory for Digital and Material Technology of Stomatology & Beijing Key Laboratory of Digital Stomatology;

【通讯作者】 邹晓英;岳林;

【机构】 北京大学口腔医学院·口腔医院牙体牙髓科国家口腔疾病临床医学研究中心口腔数字化医疗技术和材料国家工程实验室口腔数字医学北京市重点实验室

【摘要】 目的:探讨根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)摄取牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)外泌体的作用,为揭示其内吞外泌体的途径提供依据。方法:(1)采用超速离心法结合超滤法提取DPSCs外泌体,采用透射电镜观察法、纳米粒子示踪分析法以及Western Blot对其进行鉴定。(2)采用PKH-26膜标记技术标记DPSCs外泌体,37℃条件下将其与SCAP共培养作为阳性对照组,4℃条件下将其与SCAP共培养作为低温处理组,同时设置阴性对照组。采用免疫荧光染色法观察不同培养温度条件下SCAP内红色荧光标记情况。(3)通过胞吞抑制方法观察SCAP摄取外泌体的胞吞途径,分别采用10μmol/L氯丙嗪(chlorpromazine,CPZ,抑制网格蛋白介导的胞吞途径)作为CPZ组、200μmol/L金雀异黄素(genistein,抑制小窝蛋白介导的胞吞途径)作为Genistein组、50μmol/L LY294002抑制巨胞饮(macropinocytosis)作用作为LY294002组处理SCAP,将PKH-26标记的DPSCs外泌体与SCAP共培养,同时设置溶剂对照组(添加与抑制剂组等量的DMSO),采用免疫荧光染色技术观察SCAP内红色荧光标记情况和流式细胞技术分析有红色荧光标记的SCAP百分比。结果:(1) DPSCs外泌体形态呈茶托样,具有双层膜结构,粒径峰值为144 nm,能够表达肿瘤易感基因(tumor susceptibility gene、TSG) 101蛋白、CD63蛋白,二者皆为外泌体标志蛋白,符合外泌体特征。(2)免疫荧光结果显示,37℃共培养6 h后可见SCAP内有大量红色荧光(PKH-26)标记,而4℃共培养6 h后,SCAP内未见明显红色荧光(PKH-26)标记。(3)免疫荧光结果显示胞吞抑制后,SCAP内部红色荧光(PKH-26)标记减少,流式结果显示阳性对照组红色荧光标记的SCAP占35.0%,阴性对照组红色荧光标记的SCAP占0.5%,溶剂对照组红色荧光标记的SCAP占29.7%,CPZ组、Genistein组、LY294002组分别下降至13.7%、16.6%、20.9%。结论:SCAP能够摄取DPSCs外泌体,低温可影响该摄取过程; SCAP摄取外泌体主要依赖网格蛋白介导的胞吞途径、小窝蛋白介导的胞吞途径以及巨胞饮途径。

【基金】 国家自然科学基金(81650005,81200773)~~
【所属期刊栏目】 论著 (2020年01期)
  • 【DOI】10.19723/j.issn.1671-167X.2020.01.007
  • 【分类号】R329.2
  • 【下载频次】149
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