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小麦TaSnRK2.1蛋白的原核表达及抗体制备

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【作者】 乔金柱麻楠孙天杰李姗王冬梅

【Author】 QIAO Jinzhu;MA Nan;SUN Tianjie;LI Shan;WANG Dongmei;Key Laboratory of Hebei Province for Plant Physiology and Molecular Pathology/College of Life Sciences, Hebei Agriculture University;

【通讯作者】 王冬梅;

【机构】 河北农业大学河北省植物生理与分子病理学重点实验室/生命科学学院

【摘要】 为深入研究小麦TaSnRK2.1在小麦-叶锈菌互作过程中的功能,PCR扩增TaSnRK2.1的开放阅读框(ORF)全长,对其进行生物信息学分析。结果表明,该基因开放阅读框全长为1 029 bp,编码342个氨基酸,相对分子质量38.78 kDa,等电点为5.78。构建重组原核表达载体pColdⅡ-TaSnRK2.1,并转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)。使用终浓度0.5mmol/LIPTG诱导基因表达,并进行电泳检测。结果显示,诱导蛋白(包涵体)在约39 kDa处有明显条带,与预测蛋白分子量大小一致。利用Ni-NTA亲和层析纯化获得目的蛋白,并将之作为抗原制备兔源多克隆抗体。经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,抗体效价为1∶25 600,采用Western-blotting检测分析该抗体的特异性,结果显示该多克隆抗体能够特异结合TaSnRK2.1。本试验为进一步研究TaSnRK2.1在小麦-叶锈菌互作过程中的功能奠定了基础。

【关键词】 小麦TaSnRK2.1原核表达抗体制备Western Blotting
【基金】 国家自然科学基金项目(31171472;31871548);高等学校博士学科点专项科研基金资助课题(优先发展领域)(20111302130001);河北省应用基础研究计划重点基础研究项目(12967149D)
  • 【DOI】10.13320/j.cnki.jauh.2019.0093
  • 【分类号】S512.1
  • 【下载频次】15
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