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刺梨及其近缘种PCR实验体系的建立与优化

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【作者】 文晓鹏2邓秀新

【Author】 Wen Xiaopeng 1,2 and Deng Xiuxin 1 ( 1 National Key Laboratory of Crop Genetic Improvement ,Huazhong Agricultural University,Wuhan,Hubei430070China;2 Agricultural College,Guizhou University,Guiyang,Guizhou550025China)

【机构】 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室,华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室 湖北武汉430070贵州大学农学院,贵州贵阳550025,湖北武汉430070

【摘要】 以刺梨及其近缘种月季为试材,进行了RAPD-PCR实验参数的确立和优化试验。结果表明,刺梨及月季25μL反应体系的最优组成为2.5μL10×反应缓冲液,2mmol/LMg2+,0.2mmol/LdNTP,1.6mg/L模板DNA,0.4μmol/L随机引物和1.2UTaqDNA多聚酶。经PCR扩增验证,此反应体系亦适宜于刺梨的部分近缘种,可有效用于RAPD分析;通过将退火温度提高至50℃或采用“Touchdown”扩增程序,并在50μL反应体系中适当增加特异引物对浓度(1.0μmol/L),模板DNA(4.0mg/L)和TaqDNA多聚酶(3.0U/管)的使用量,建立起适合于刺梨特异DNA片段检测及回收的特异PCR扩增实验体系,为刺梨的分子克隆奠定了技术基础。

【关键词】 刺梨近缘种PCR扩增实验体系
【基金】 国家自然科学基金;贵州省自然科学基金资助项目。
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2003.01.009
  • 【分类号】Q943
  • 【被引频次】32
  • 【下载频次】196
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