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葡萄卷叶伴随病毒-3复制酶基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

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【作者】 徐章逸王国平洪霓

【Author】 XU Zhang-yi, WANG Guo-ping, HONG Ni( College of Plant Science and Technology,Wuhan,Hubei 430070 China; National Key Lab of Agriculture Microbiology,Wuhan,Hubei 430070 China; National Indoor Conservation Center for Virus-free Gemplasms of Fruit Crops, Huazhong Agricultural University, Wuhan,Hubei 430070 China)

【机构】 华中农业大学植物科学技术学院华中农业大学植物科学技术学院 武汉430070武汉430070农业微生物国家重点实验室武汉430070武汉430070国家果树脱毒种质资源室内保存中心

【摘要】 以感染有葡萄卷叶伴随病毒-3(Grapevineleafroll-associatedvirus-3,GLRaV-3)的葡萄韧皮部组织中提取到的dsRNA为模板,利用RT-PCR和重叠延伸PCR技术,对GLRaV-3的复制酶(RNA-dependentRNApolymerase,RdRp)基因进行克隆,获得了预期大小的目标片段。将此片段克隆到载体pBluescriptSKⅡ,酶切鉴定后测序。测序结果表明:RdRpcDNA全长为1618bp。经BLAST分析推导其可能编码538个氨基酸,与报道的GLRaV-3美国分离物NY1RdRp核苷酸相似性为99.3%,氨基酸相似性为99.6%;推导的氨基酸序列与其同属的PMWaV-2、GLRaV-1和LChV-2的RdRp氨基酸序列相似性分别为53%,50%和38%,包含了GDD在内的8个保守基元序列。将该段RdRp连接到表达载体pET22b(+)上,获得的重组子pET-RdRp转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS后,用1mmol/L的IPTG进行诱导。SDS-PAGE分析表明,RdRp在大肠杆菌中被诱导表达,融合蛋白分子量约为61kDa。

【基金】 科技部863课题资助项目(2001AA241142)。
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2006.02.027
  • 【分类号】S436.631
  • 【被引频次】6
  • 【下载频次】178
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