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板栗SSR和RAPD技术体系的建立

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【作者】 王同坤董超华马艳齐永顺张京政柏素花

【Author】 WANG Tong-kun1, DONG Chao-hua2, MA Yan1, QI Yong-shun1, ZHANG Jing-zheng1, BAI Su-hua3(1Department of Horticulture & Landscape Changli,Hebei 066004 China; 2Department of Life Science, Hebei Normal University of Science & Technology, Changli, Hebei 066004 China; 3Department of Lif e Science, Laiyang Agricultural College, Laiyang, Shangdong 260019 China)

【机构】 河北科技师范学院园艺园林系河北科技师范学院生命科学系莱阳农学院生命科学学院 河北昌黎066004河北昌黎066004山东青岛260019

【摘要】 主要从板栗DNA提取、PCR条件的优化等环节对SSR和RAPD的反应条件进行了优化。结果表明,采用PVP和β-巯基乙醇联合除酚,用多次洗涤和高盐相结合进行除糖提取高质量板栗基因组DNA,所获得的DNA完整,无降解,分子量在23kb以上,可扩增、可酶切,D260nm/D230nm在2.0以上,D260nm/D280nm为1.8~2.0,产率为40~300μgDNA/g叶组织,完全满足SSR、RAPD、AFLP等分子标记技术分析的需要。采用单因素对PCR反应体系中各个影响因素进行优化,结果表明对PCR结果影响最为明显的是退火温度和Mg2+浓度的变化。对退火温度和Mg2+浓度进行优化,确定RAPD的PCR反应体系Mg2+浓度为2.0mmol/LMgCl2,退火温度38℃;SSR反应体系Mg2+浓度为2.0mmol/L,退火温度56℃。建立了一套完善的适用于板栗的SSR和RAPD分析的稳定技术体系。

【关键词】 板栗SSRRAPD
【基金】 河北省自然科学基金资助项目(C2004000404)。
  • 【分类号】S664.2
  • 【被引频次】11
  • 【下载频次】285
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