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TAIL-PCR方法快速克隆银杏查尔酮合成酶基因及序列分析(英文)

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【作者】 许锋程水源王燕李琳玲程述汉

【Author】 XU Feng1,2,CHENG Shui-yuan1,3*,WANG Yan1,LI Lin-ling1,CHENG Shu-han2(1College of Horticulture and Gardening,Yangtze University,Jingzhou,Hubei 434025 China;2College of Horticulture Science and Engineering,Shandong Agricultural University,Taian,Shandong 271018 China;3College of Life Science and Engineering,Huanggang Normal University,Huanggang,Hubei 438000 China)

【机构】 长江大学园艺园林学院山东农业大学园艺科学与工程学院 湖北荆州434025山东农业大学园艺科学与工程学院山东泰安271018湖北荆州434025黄冈师范学院生命科学与工程学院湖北黄冈438000湖北荆州434025

【摘要】 热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法已广泛应用于从多种生物克隆已知DNA序列的侧翼序列。对传统的TAIL-PCR方法进行改良:(1)将TAIL技术应用于TAIL-PCR中第3步PCR循环。(2)以10bp的随机简并引物即RAPD引物代替基因侧翼简并引物。以银杏品种家佛手的叶基因组DNA为模板,利用简并引物克隆到银杏查尔酮合成酶基因(CHS)片段序列Gbchs1,以此序列设计3条特异引物,利用改良的热不对称交错PCR方法克隆到CHS基因Gbchs2。结果表明,Gbchs2长1238bp,编码304个氨基酸并包含3’末端序列。GbCHS2蛋白质序列与其他植物的CHS蛋白质序列高度同源,包含CHS蛋白质保守的环化作用活性位点,催化活性位点、香豆素活性位点、及催化活性基序。改良后的TAIL-PCR方法为基因全长的克隆提供了一种简单快速高效的新方法。

【基金】 教育部新世纪优秀人才计划(NCET-04-0746);教育部地方重点攻关项目(02095);湖北省自然科学基金(2002AB094);湖北省青年杰出人才基金(2003AB014);湖北省教育厅重大科技项目(Z2006270002)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2007.02.024
  • 【分类号】S664.3
  • 【被引频次】40
  • 【下载频次】624
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