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甜瓜蔗糖磷酸合成酶基因全克隆及工程载体的构建

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【作者】 侯丽霞何启伟赵双宜焦自高王崇启董玉梅

【Author】 HOU Li-xia1, HE Qi-wei1,ZHAO Shuang-yi2,JIAO Zi-gao1,WANG Chong-qi1,DONG Yu-mei1 (1Vegetable Research Institute,Shandong Academy of Agricultural Sciences, 2College of Biological Science,Shandong University,Jinan,Shandong 250100 China)

【机构】 山东省农业科学院蔬菜研究所山东大学生命科学院

【摘要】 蔗糖磷酸合成酶在甜瓜果实蔗糖合成途径中起关键性的调节作用,克隆该基因并导入甜瓜低糖自交系,可改良甜瓜果实品质创新优良种质。从甜瓜幼苗叶片提取总RNA,利用RT-PCR与Southern blot方法相结合,重组子质粒经限制性内切酶酶切和PCR验证以及测序同源性比较,克隆到基因的5’(2859bp)和3’(852bp)。应用高保真Taq聚合酶PCR拼接蔗糖磷酸合成酶完整cDNA序列3692bp,该片段与GenBank中其它植物基因序列具有97% ̄99%的同源性,登录号DQ364058。应用BamHⅠ、KpnⅠ、BglⅡ限制性酶切获得植物双元表达载体pROK2及基因的线性片段,通过T4连接酶反应,构建了以CaMV35S为启动子,以Tnos为终止子的工程载体pROK-SPS,该载体含有Npt-II选择标记基因。

【基金】 山东省农业良种工程项目—蔬菜种质资源创新(鲁科农字[2004]113号)
【所属期刊栏目】 研究论文 (2008年04期)
  • 【DOI】10.13925/j.cnki.gsxb.2008.04.027
  • 【分类号】S652
  • 【被引频次】6
  • 【下载频次】232
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